ساخت سازه ای نوترکیب جهت الحاق ژن e-gfp به محل ژن فاکتور 8 در سلول های رده هپاتومای موشی

مقدمه: ژن درمانی به هر روشی اطلاق می شود که طی آن بیمار با کمک ایجاد تغییر ژنتیکی در سلولهای فرد بهبود یافته و یا کاملا درمان گردد. برای این منظور از استراتژیهای مختلفی جهت انتقال ماده ژنتیکی دلخواه به سلولهای مورد نظر استفاده می شود که هر یک مزایا و معایبی در پی دارند. از زمان معرفی ژن درمانی بعنوان یکی از اقدامات پیشرفته درمانی در بسیاری از بیماری ها همواره هدف گیری ژن های خاص در بافت های ویژه از دغدغه های اصلی پژوهشگران در این زمینه بوده است. هدف: در این طرح هدف وارد ساختن یک قطعه ژن در داخل توالی مورد نظر، به کمک همولوگوس ریکامبیناسیون است. در این جا قطعه ژن مورد نظر کاست بیانی egfp و توالی هدف، ژن فاکتور 8 موشی است. در این طرح می خواهیم سازه ای بسازیم که در آن کاست بیانی egfp را در کنار توالی هومولوگ قسمتی از ژن فاکتور 8 موشی قرار گیرد تا در آینده سازه ساخته شده در سلول های موشی ترنسفکت گردد. مواد و روشها: کشت سلول های موشی c57 و تخلیص dnaی ژنومی. تزاید قطعه ی از اینترون 1 ژن فاکتور 8 موشی (با نامگذاری ds) و ساب کلون آن در پلاسمید pegfp-c1 . یافته ها: در ابتدا سلول های موشی c57 کشت داده شده و dna آن تخلیص گردید. با استفاده از روش pcr قطعه ds تکثیر شد و جهت نگهداری آن از روش ta coloning کمک گرفته شد. پلاسمید حاصل جهت خارج ساختن قطعه ds با کمک آنزیم های kpni و sali برش داده شد و قطعه مورد نظر با روش تخلیص از روی ژل جدا گردید. در مرحله بعد قطعه حاصل در پلاسمید حاوی کاست pegfpساب کلون گردید و کلون حاصله تایید گردید. نتیجه گیری: در این طرح امکان ساخت سازه ای حاوی قسمتی از ژن فاکتور 8 موشی در کنار کاست ژنی egfp مورد بررسی قرار گرفت و در نهایت این امکان مورد تایید قرار گرفت. با توجه به همولوژی توالی درج شده در سازه با توالی قسمتی از ژن فاکتور 8 موشی امید است بتوان سازه را به طور هدفمند وارد ژن فاکتور 8 موش در سلول های موشی نمود. ژن egfp جهت غربالگری سلول های ترانسفکت شده مورد استفاده قرار خواهد گرفت. واژگان کلیدی: کلونینگ- همولوگوس ریکامبیناسیون- فاکتور 8